作者：杨龙; 臧彧伟; 郑淑婷; 李伟黄鳝活性分析重组表达
摘要：白细胞介素1β(IL-1β)在免疫调节和炎症反应中起着重要作用。为了解黄鳝IL-1β基因的功能,以黄鳝肝脏cDNA为模板,PCR扩增IL-1β基因后将其亚克隆至pET28a表达载体中。将序列测定验证过的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌进行IPTG诱导后Ni 2+亲和柱分离纯化获得重组蛋白rIL-1β;用SDS-PAGE电泳和Western Blot检测rIL-1β。按2μg/kg剂量对黄鳝进行腹腔注射rIL-1β,用荧光定量PCR分析注射rIL-1β对肝脏IL-1β、NF-κB、AKR和Nrf2等基因表达的影响。结果表明:成功构建了黄鳝IL-1β基因的原核表达载体并实现了重组蛋白的分离纯化;重组的rIL-1β蛋白具有较好的生物活性,腹腔注射rIL-1β显著提高了肝脏IL-1β和NF-κB基因的表达水平,却对AKR和Nrf2基因的表达有明显的抑制作用。研究为进一步深入探索鱼类IL-1β基因在免疫系统中的功能提供了参考资料。
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