作者：何京桦; 乐科易敲除大肠杆菌tnaa基因
摘要：大肠杆菌的tna A基因编码色氨酸酶,该基因的失活有利于大肠杆菌积累更多的L-色氨酸。利用CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑技术对大肠杆菌tna A基因进行敲除。首先针对tna A基因设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建gRNA表达质粒;随后人工设计同源修复供体基因序列,构建成完整的CRISPR/Cas9基因敲除系统;将该系统应用到大肠杆菌w3110-Δ中,经PCR和测序鉴定,证实目的基因tna A敲除成功,敲除效率75%。成功构建了大肠杆菌tna A基因敲除菌,为大肠杆菌L-色氨酸高产菌株的构建奠定了基础。
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