作者：王龙龙; 邱军强; 喻飞; 王浩; 吕利群gcrv104vp6蛋白vp38蛋白酵母双杂交蛋白相互作用
摘要：为探究草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒VP6和VP38蛋白的生物学功能，利用酵母双杂交Gal4系统分别筛选了能与GCRV104毒株编码的 VP6和VP38相互作用的宿主蛋白。利用RT-PCR从感染GCRV104的草鱼肾脏细胞中扩增GCRV104 s8和s10基因组片段的编码基因后，通过酶切与连接分别克隆至载体pGBKT7中，构建诱饵质粒pGBKT7-VP6和pGBKT7-VP38。对这些重组质粒进行细胞毒性和自激活检测后，分别以VP6和VP38为诱饵在草鱼酵母文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白，对筛选得到的阳性酵母菌落进行序列分析。结果表明，两个诱饵质粒pGBKT7-VP6和pGBKT7-VP38均无自激活作用；诱饵质粒pGBKT7-VP6筛选到7株阳性克隆，分别编码β肌动蛋白、augmin样复合体亚基2、甘露糖苷酶α2b1亚基、程序性细胞死亡蛋白6、真核翻译延长因子1γ和一个未知功能蛋白；诱饵质粒pGBKT7-VP38筛选到4株阳性克隆，分别编码剪切与多聚腺苷酸化特异性因子5、高迁移率组蛋白核小体结合结构域2、葡萄糖转运体X和蛋白酶体亚基β7。结果为进一步探究GCRV104 毒株编码的VP6、VP38与宿主蛋白及其涉及的信号通路的相互作用奠定了基础。
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