作者：曹荣月; 申克宇; 王学军; 凤姣; 刘景晶发酵聚乙二醇化学修饰
摘要：目的提高重组L-门冬酰胺酶(Rl-ASP)工程菌的表达量,分离纯化rL-ASP并对之进行PEG化学修饰.方法 将带有编码rL-AS的基因的质粒(pKA)导入不同的宿主菌中,挑出高表达菌株,同时优化发酵培养基,分离纯化获得的高纯度rL-ASP再用PEG进行化学修饰,SDS-PAGE检测修饰效果.结果在pH7.0的条件下,宿主菌为JM109的工程菌pKA/JM109酶活力最高,三角瓶振摇培养的酶活力可达216×103IU/L;发酵罐发酵培养,酶活力达312×103IU/L.纯化后的rL-ASP比活力为220 IU/mg,rL-ASP经过PEG化学修饰生成rL-ASP-PEG,分子量发生改变.结论改变目标蛋白表达的宿主菌和优化发酵工艺,提高了rL-ASP的表达量,纯化的rL-ASP经过PEG化学修饰后分子量增大.
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