作者：郭凤羽; 殷瑛; 宰晓东; 李汭桦; 王美荣; ...布鲁菌omp19突变体构建免疫原性
摘要：目的:构建Omp19突变体,分析突变体与Omp19在理化性质和免疫原性上的异同,初步探究Omp19序列3个半胱氨酸残基(Cys)对原蛋白的影响,为以Omp19为组分的布鲁菌亚单位疫苗研究提供依据。方法:以前期构建的含有Omp19核酸序列的质粒为模板,分别缺失或替换序列中编码Cys的碱基,并连接至原核表达载体pET32a,IPTG诱导表达并利用SPXL柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定纯化的蛋白。利用质谱、圆二色光谱等对突变体M1、M4开展理化性质分析。ELISA法检测M1、M4免疫小鼠后产生的Omp19特异性抗体和细胞因子水平,用布鲁菌A19株攻击免疫小鼠评价免疫保护效果。结果:获得了无多余条带无多聚体的M1、M4重组蛋白。Omp19、M1、M4相对分子质量测定结果分别为31550、15804、15757,提示Omp19以二聚体形式存在;N端前6个氨基酸残基序列与理论序列一致。Omp19在1、86和106位检测到二硫键;M1在86、106位检测到二硫键;M4分子中检测不到二硫键的存在。圆二色谱结果显示Cys缺失或替换未对Omp19的二级结构造成影响。免疫实验显示,M1、M4激发的Omp19特异的抗体水平、细胞因子水平及对小鼠的保护效果与Omp19无显著性差异。结论:Cys会影响Omp19重组蛋白的制备和质控,其缺失或替换对Omp19原有的理化性质和免疫原性影响不大,突变体蛋白M1、M4作为布鲁菌亚单位疫苗的候选抗原值得进一步研究。
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