作者：王佳美; 巩新; 刘党生; 吴军; 刘波寨卡病毒e蛋白原核表达多克隆抗体
摘要：目的：在大肠杆菌BL21（DE3）中重组表达寨卡病毒（ZIKV）囊膜（E）蛋白的200个氨基酸（138~338）截短片段ZIKV-E200，制备其多克隆抗体，为寨卡病毒亚单位疫苗后续研究提供检测抗体。方法：用全基因序列合成方法合成寨卡病毒E蛋白全长基因，以该基因为模板，用PCR方法克隆ZIKV-E200基因片段，经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后连接到pET22b载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，获得重组质粒pET22b-ZIKV-E200，将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞得到重组表达菌株pET22b-ZIKV-E200。将37℃诱导表达后的菌液超声波破碎处理后制备ZIKV-E200蛋白，将制备的抗原ZIKV-E200免疫BALB/c小鼠，经3次免疫后，采集血清制备其相应的多克隆抗体，采用Western印迹检测多克隆抗体的特异性。结果：获得ZIKV-E200基因片段，并构建了其相应的原核表达载体pET22b-ZIKV-E200，在大肠杆菌中表达了重组ZIKV-E200蛋白，其相对分子质量约为25 000，与理论值一致；用分离的蛋白ZIKV-E200免疫小鼠后获得了抗ZIKV-E蛋白的多克隆抗体，该多克隆抗体检测到了酵母表达的寨卡病毒E蛋白。结论：ZIKV-E200蛋白的多克隆抗体可用于酵母表达的寨卡病毒E蛋白的检测等研究。
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