作者：张连成; 高丽华; 张昕; 潘芸; 高招刚; 李...尿激酶型纤溶酶原激活因子绿色荧光蛋白真核表达融合蛋白
摘要：目的：构建人尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）截短型突变体与绿色荧光蛋白（EGFP）分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达。方法：呆用PCR法，分别以质粒pIRES2-EGFP和重组质粒pcDNA3．1（＋）／uPA为模板，扩增出带BarnHⅠ和Xba Ⅰ酶切位点的ECFP及带NheⅠ和HindⅢ 酶切位点的uPA截短体基因片段，先后将EGFP和截短型uPA基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）上，转入HEK293F细胞，用G418对转染细胞进行加压筛选，通过共聚焦显徽镜观察和ELISA方法鉴定表达产物。结果：DNA测序结果显示，uPA不同截短型突变体基因片段与EGFP基因融合的真核表达载体构建成功，共聚焦显微镜观察发现HEK293F细胞中有绿色荧光且定位干细胞质中，ELISA检测到HEK293F细胞培养上清中分泌型融合蛋白的表达。结论：构建了uPA截短型突变体与EGFP分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达，为后期研究uPA的相互作用蛋白及其生理功能奠定了基础。
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