作者：李涛; 满江红; 巩伟丽; 靳宝锋外周血单核细胞分离电穿孔转染
摘要：目的：建立分离纯化人外周血单核细胞及转染的有效方法。方法：应用基于HISTOPAQUE的密度梯度离心及抗体标记纯化的方法分离单核细胞,并以电穿孔技术转染绿色荧光蛋白（GFP）表达质粒、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）小干扰RNA。结果：基于外周血单核细胞的表面标志分子CD14的流式细胞分析表明得到了高纯度（89.95%）的外周血单核细胞;GFP荧光照片显示GFP表达质粒的转染效率为60%～70%;免疫印迹显示TRAF6的表达抑制（〉90%）下调了脂多糖（LPS）对JNK的激活,说明通过电穿孔技术有效递送了TRAF6小干扰RNA,表明单核细胞若缺少TRAF6将抑制LPS-TLR4信号通路的激活。结论：建立了一种高效的从人外周血中分离原代单核细胞的方法,且应用基于NucleoFectorⅡ的电穿孔技术实现了对此原代单核细胞的高效转染,为进一步外周血单核细胞的相关功能研究奠定了方法学基础。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
