作者：王平; 黄庆生; 丁天兵; 任君萍; 宋建华; ...sars冠状病毒囊膜蛋白原核表达单克隆抗体
摘要：从基因库中调取SARS冠状病毒囊膜E蛋白基因序列,用连接PCR方法合成完整片段.测序确认后与人免疫球蛋白(IgG)序列Fc段连接并克隆至原核表达载体pPRO EX Hta中.从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb).连接PCR扩增出231 bp的DNA,测序结果与GenBank公布的序列一致,与人IgG序列Fc段基因连接后克隆至原核表达载体,在大肠杆菌中获得较好表达.表达产物经SDS-PAGE后,在相对分子质量(Mr)约37 000处可见1条明显的诱导表达条带.Western印迹的结果表明,该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异性免疫反应.从SDS-PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB/c小鼠,制备出2株抗E蛋白的mAb.这些mAb与SDS-PAGE凝胶上Mr约为37 000的蛋白带也呈现很强的免疫反应.所获得的重组表达E蛋白及特异性mAb为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础.
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