作者：于芳; 李朝; 周晓巍; 黄培堂tpa突变体哺乳动物细胞二氢叶酸还原酶真核表达载体脂质体转染法4000u工程细胞株pci高效表达常规技术分子克隆cdna高表达编码区阳离子cho构建筛选基因蛋白测序质粒
摘要：利用携带有二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的pCI载体,实现tPA突变体(FrGGI)在CHO-dhfr-细胞中的高效表达,获得高表达细胞株.采用分子克隆常规技术,将去除3'端非蛋白编码区的tPA突变体cDNA与pCI载体连接,构建真核表达载体pCI-tPA;采用阳离子脂质体转染法转染CHO-dhfr-细胞.经酶切及测序鉴定,证明所构建的质粒正确,转染CHO-dhfr-细胞后,经过MTX加压筛选,得到了10株表达水平较高的细胞株,其活性可达每106细胞4000U/24h.以上结果为进行tPA突变体工程细胞株的筛选奠定了基础.
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