作者：于梅; 周建光体内靶分子et大肠杆菌打靶载体bac内源性重组工程双链dna分子
摘要：大肠杆菌的同源重组依靠内源性的RecA蛋白.RecBCD降解双链线性DNA分子,因此必须构建环状质粒打靶载体才能完成体内重组,操作过程繁琐,所需同源臂长.最近建立起的依赖于Rac噬菌体的ET重组系统和基于λ噬菌体的Red重组系统,可有效利用线性DN段作为打靶分子,对大肠杆菌染色体DNA和BAC、PAC载体中包含的真核细胞基因组DNA进行基因敲除、敲入、替换、单碱基突变及体内基因克隆等修饰.这2种系统重组效率高,用PCR方法便可合成双链线性DNA打靶分子,不需要限制酶和连接酶,操作过程简单、精确、快速、经济,大大缩短了构建打靶载体的时间,成为功能基因组研究的有力工具.
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