作者：高红伟; 高新; 鲍国强; 徐莉娟; 王颖丽; ...血型毕赤酵母菌红细胞新生菌株蛋白浓度比活性重组酶疏水层析
摘要：α-半乳糖苷酶是B→O血型改造研究中的关键工具酶.在获得了可分泌表达α-半乳糖苷酶的基因工程毕赤酵母菌株的基础上,进行了工程菌株在5 L发酵罐中的发酵.发酵液上清中α--半乳糖苷酶活性为80～150 U/mL,蛋白浓度为3～4.5 mg/mL,比活性约为20～30 U/mg.发酵液采用超滤、阳离子交换层析、疏水层析和阴离子交换层析等纯化方法,建立起了规模化生产重组α-半乳糖苷酶的工艺.制备的重组酶纯度经鉴定达98%以上,符合新生物制品的纯度要求.制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,从而解决了应用此酶开展B→O血型改造研究的关键问题.
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