作者：韩炯; 张晓光; 刘新平; 药立波表达阳性克隆ph靶蛋白肽库短肽结构域模体iptg
摘要：将胰岛素受体底物-1(IRS-1)的PH结构域(pleckstrin homology domain)编码序列克隆到融合表达载体pRSET A中,阳性克隆经IPTG诱导,表达出氨基端带6个连续组氨酸残基的融合蛋白.经检测,表达的目的蛋白一部分以可溶形式存在.利用Ni-NTA金属螯合亲和层析法在非变性条件下对表达的目的蛋白进行纯化,纯度大干98%.将纯化的目的蛋白包被于聚苯乙烯平皿上作为靶蛋白,经过4轮淘筛,得到能够与IRS-1的PH结构域相结合的重组噬菌体克隆;从中随机挑选出50个克隆进行DNA序列测定,对获得的短肽序列进行了分析.并通过ELISA检测了这些克隆与IRS-1的PH结构域的结合活性.
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