作者:王雪; 宋长征复性重组人骨形成蛋白大肠杆菌表达样品溶液nih3t3细胞人工蛋白质分子伴侣
摘要:带有pBV221-hBMP-7的E.coli表达得到的rhBMP-7以不溶的包涵体形式存在,用高浓度的变性剂溶解后,经过DEAE-FF纯化,得到高纯度的目的蛋白,达95%以上.分别用尿素浓度梯度降低法、添加促复性剂及人工分子伴侣法对蛋白质进行复性,并通过不同方法对复性结果进行比较.Westem b1ot中辉度扫描结果显示,GSH/GSSG法样品二聚体/单体比例为79.5/20.5,尿素浓度梯度降低法二聚体/单体比例为73.6/26.4,表明GSH/GSSG法复性样品溶液上清中含较高比例的蛋白质二聚体.根据不同复性样品对NIH3T3细胞ALP活性影响大小的比较结果,氧化还原剂最有助于二聚体的形成,蛋白质活性最高.
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