作者：赵雅童; 何光明; 瓮茹茹; 石爱琴; 路福平...基因敲除甘露醇甘露醇脱氢酶nadh
摘要：为了探究甘露醇分解利用途径对甘露醇合成的影响,在重组菌株R1(K-12/pTrc99a-mdh)的基础上,通过CRISPR/Cas9 敲除E.coli PTS 系统中的cmtA、cmtB、mtlA 基因,阻断了E. coli K-12 中甘露醇的分解途径,获得了重组菌株R3(K-12/ΔcmtAΔcmtBmdh^+)和R5(K-12/ΔcmtAΔcmtBΔmtlAmdh^+)。与出发菌株R1 相比,R3 的生长速率没有降低,而R5 的生长速率明显下降。并且R5 在以甘露醇为唯一碳源的培养基上已无法生长,说明cmtA、cmtB、mtlA 三个基因全部敲除后,菌株已无法再利用甘露醇作为碳源进行生长。最后,构建的重组菌株R5,测得MDH 酶活力为258 U/mL,用高效液相色谱对胞外产物进行检测,可检测到少量的甘露醇,为进一步探究大肠杆菌合成甘露醇的调控机制奠定基础。
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