作者：徐雅梦; 姜晓冰; 于涛单核细胞增生李斯特菌ladr蛋白外排泵调控
摘要：研究单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)调控子LadR 对外排泵MdrL 的调控作用及方式。采用同源重组技术构建ladR 基因缺失菌株ΔladR ;通过实时荧光定量PCR检测mdrL 基因在野生株EGD-e 和突变株ΔladR 中的转录水平;构建重组蛋白表达菌株BL21(DE3)-ladR 并纯化重组蛋白His6-LadR ;通过凝胶阻滞试验检测LadR 蛋白与mdrL 基因启动子区域的结合活性。成功构建ladR 基因缺失菌株ΔladR。与野生株EGD-e 相比,突变株ΔladR 中 mdrL 基因的转录水平提高约51 倍;成功构建重组蛋白表达菌株BL21(DE3)-ladR,纯化得到浓度为1 mg/mL 的重组蛋白His6-LadR ;凝胶阻滞实验结果显示,重组蛋白His6-LadR 可与mdrL 基因的启动子区域特异性结合。Lm 的调控子LadR 通过与mdrL 基因启动子区域特异性结合实现对外排泵MdrL 的负调控。
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