作者：罗岸烟草远缘杂交早期胚胎发生父本特异表达基因克隆
摘要：已知烟草远缘杂种的合子中EB30基因（EST序列号EB426694）的表达具有父本特异性。参考NCBI的EST序列设计引物，克隆得到该基因的CDS序列，并对其编码的蛋白进行生物信息学分析。使用染色体步移和hiTAIR-PCR技术获取EB30基因的5＇侧翼序列（启动子和5＇ UTR）。构建由该基因5＇侧翼序列驱动的EB30-EGFP融合蛋白表达载体并转化烟草。结果表明， EB30蛋白由211个氨基酸组成，蛋白分子量为22.6162 kD，等电点pI为5.63。该蛋白具有亲水性，可能定位于线粒体中。烟草EB30蛋白与同属茄科的番茄和马铃薯的蛋白序列相似度最高，约为73%。不同物种的同源蛋白的N端和C端都具有一段较为保守的序列区段。观察转基因植株合子和二胞原胚能检测到较强荧光，证实所获EB30基因的5＇侧翼序列在早期胚胎发生时期具有启动子活性。
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