作者：刘秀侠; 杨雄; 陈红英gp41mper2f54e10单链抗体
摘要：为深入研究2F5 和4E10 抗体，构建了特异性识别HIV-1 病毒MPER 区域的2F5 和4E10 单链抗体的重组质粒，进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR 扩增及基因重组技术，获得2F5-scFv 和4E10-scFv 基因，将其插入原核表达载体pET-28a（＋） 上，获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21（DE3） 及Rosetta-gami2（DE3）pLysS 中，IPTG 诱导表达，SDS-PAGE 检测发现，2F5-scFv 和4E10-scFv 在两种表达菌中均以包涵体形式存在，重组蛋白分子量分别约为27 kD 、29 kD 。变性条件下，利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化，经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA 检测表明，制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER 抗原都有特异性结合活性。
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