作者：张梅; 邬敏辰; 金坚人血清白蛋白融合蛋白构建及表达
摘要：构建人甲状旁腺激素（1—34）二联体与人血清白蛋白融合蛋白的表达载体，并表达得到该融合蛋白。通过设计强特异性的引物，利用重叠PCR技术，定向定量的拼接得到hPTH（1—34）二联体-HSA融合蛋白的基因；将构建好的融合基因插入表达载体pPIC9K，大量扩增重组质粒，并用Sal I线性化，电击转化毕赤酵母GS115，经组氨酸缺陷和G418抗性双重筛选得到阳性转化子；挑选阳性转化子进行甲醇诱导表达。测序结果表明得到的重组质粒pPIC9K—hPTH（1—34）二联体-HSA与目标设计完全一致；基因组PCR鉴定结果证明成功构建了hPTH（1-34）二联体-HSA融合基因的毕赤酵母（GS115）表达系统；SDS—PAGE电泳表明融合蛋白获得了表达，尿微量白蛋白试剂盒测定甲醇诱导表达3d后融合蛋白的产量为127mg／L。
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