作者：张秉强; 吴莹; 唐霓; 郭进军; 黄英; 汤华...southern杂交乙肝病毒膜法hepg2细胞琼脂糖凝胶电泳真核表达载体总dna化学发光标记dna量hbv检测试剂盒基因片段推广应用尼龙膜灵敏度条带转染探针
摘要：目的评价向下转膜法在乙肝病毒(HBV)Southern杂交中的应用效果.方法用带有1.3倍HBV基因的真核表达载体转染HepG2细胞,使其产生瞬时HBV表达,72小时收集细胞并提取细胞总DNA,琼脂糖凝胶电泳后,以向上和向下两种方式转移在尼龙膜上;用化学发光标记和检测试剂盒将乙肝病毒基因片段标记成探针,再与向上和向下转膜后的尼龙膜进行杂交,判断产生明显HBV杂交条带所需的细胞总DNA量,从而验证向下转膜法在乙肝病毒Southern杂交中的应用效果.结果发现向下转膜后,检测HBV表达所需的细胞总DNA量极少,灵敏度高,0.5μg细胞总DNA电泳后转膜,即可检测出HBV DNA的表达,凝胶中仅有8%的DNA残留;而向上转膜所需的总DNA量大,灵敏度低,25μg的细胞总DNA电泳后转膜,仅能检测出弱的条带.结论向下转膜法是一种较好的转膜方式,适于对乙肝病毒的Southern杂交,值得推广应用.
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