作者：刘文静; 郑永祥; 张革; 唐章勇; 余蓉细胞色素c影响因素三氯乙酸二聚体生物分离
摘要：细胞色素C为临床上应用广泛的生化药品。为了提高细胞色素C的质量,对制备过程中影响细胞色素C质量的因素进行考察,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS PAGE)对不同工艺制备的细胞色素C进行纯度分析,并对SDS PAGE图谱中约2.5×104的蛋白质进行液相色谱串联质谱法(LC MS/MS)分析与鉴定。结果表明:在SDS PAGE电泳图中,使用三氯乙酸(TCA)沉淀剂的传统工艺制备的细胞色素C样品除了有1.22×104的细胞色素C,还包括1个约2.5×104的蛋白分子;而不使用三氯乙酸沉淀剂的新工艺制备的细胞色素C样品,仅有1.22×104的细胞色素C,而未发现约2.5×104的蛋白。SDS PAGE图谱中分子量2.5×104的蛋白分子的LC MS/MS分析与鉴定结果表明其与猪源细胞色素C覆盖率最大(达到76%),结合其分子量大小,可以证明该蛋白为细胞色素C二聚体。细胞色素C制备过程中三氯乙酸沉淀剂易导致细胞色素C形成二聚体,故三氯乙酸是影响细胞色素C质量的关键因素之一。
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