DNA重组酶Cre介导载体间基因的重组转移

作者：王文棋; 盖颖; 陆海; 李义; 蒋湘宁dna重组酶cre基因供体ptlggfp基因绿色荧光菌落

摘要：DNA重组酶Cre可以识别LoxP位点,使含有LoxP位点的DNA分子发生重组：2个同向LoxP之间的DN段被删除,2个环状DNA分子被整合为一个大分子.基于Cre酶的这些作用特性,构建了一套载体间基因的重组转移体系,在Cre酶的作用下,gfp基因被从基因供体pTLG上切除下来,然后转移到基因受体pET-LoxP上,从而快速、简便地完成了gfp基因高效表达载体pET-gfp的构建.gfp基因在大肠杆菌BL21（DE3）中被诱导表达,使菌落产生了可视的绿色荧光.通过对荧光菌落的计数分析,比较了环状基因供体pTLG和线性基因供体pTLG对有效重组率的影响.使繁琐的传统载体构建变为简单的酶促反应,极大地简化了载体构建步骤,为Cre酶在基因克隆和亚克隆中的应用提供了很好的研究基础.

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