胶质细胞源性神经营养因子（△N39）-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究

作者：崔敏; 潘新; 王丽梅融合蛋白蛋白质转运血脑屏障

摘要：为了研究胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）在中枢神经系统疾病中的治疗应用，运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF（△N39）活性片段．将HIV-1 Tat蛋白转导区（protein transduction domain，PTD）的9个碱性氨基酸^49RKKRRQRRR^57模拟物9个精氨酸（R9）与GDNF（△N39）活性片段融合表达，获得纯度达95％以上的GDNF（△N39）-R9融合蛋白．将GDNF、GDNF（△N39）、GDNF（△N39）-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFRα1和Ret的PC12细胞中，观察它们的神经营养活性和毒性．运用脑微血管内皮细胞株B-Endo3，观察GDNF（△N39）-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能：运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障，Transwell法检测Tat-GDNF（△N39）蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力．结果显示：GDNF（△N39）-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性，促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFRα1和Ret受体的PC12-GFRα1-Ret细胞株的存活，没有显示毒性，并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障．

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