应用TDI-FP技术分析宫颈癌组织HPV16 E7 基因A647G点突变

作者：高艳娥; 张菊; 樊江波; 陈中灿; 阎小君人乳头瘤病毒16型e7基因突变荧光偏振宫颈癌

摘要：模板指导的末端碱基掺入反应结合荧光偏振检测技术(template direct dye-terminatorincorporation with fluorescencepolarization,TDI-FP)是SNP检测新技术.应用TDI-FP方法分析中国陕西HPV16阳性宫颈组织HPV16 E7基因第647位核苷酸A→G热点突变(即A647G),首先在HPV16阳性的91例宫颈癌及49例正常/宫颈炎妇女宫颈DNA标本中,PCR扩增含647位点在内的HPV16 E7部分基因,然后将紧邻647位点5′端的寡核苷酸探针与PCR产物内的模板杂交,并延伸一个与647位点碱基互补的荧光标记碱基:TAMRA-ddTTP或R110-ddCTP.用荧光偏振仪读取荧光偏振(EP)值,根据升高的相应FP值判断647位点碱基.结果表明,宫颈组织HPV16 E7 A647G的总体检出率为35.71%(50/140).宫颈癌组的A→G突变率为42.86%(39/91),显著高于正常/宫颈炎组22.45%(11/49)的突变率(x22=5.778,P=0.016),两组间的OR值为2.59(95%CI=1.17～5.71).提示TDI-FP可用于HPV有意义点突变的分析;我国陕西地区妇女HPV 16 A647G突变率及其对宫颈癌的警示性与其他地区相比有明显差异,该地区携带此突变病毒株的妇女患宫颈癌的风险可能较高.

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