运用mRNA体外展示技术筛选胸苷酸合成酶RNA亲和肽

作者：阎松; 牛荣丽; 张培军; 林秀坤mrna体外展示筛选胸苷酸合成酶亲和肽

摘要：以体外选择方法筛选不同功能的核酸、肽和蛋白质是近年的研究热点,mRNA体外展示是一种新兴的高效多肽选择技术,其基本原理是通过含嘌呤霉素寡核苷酸的Linker使mRNA与它编码的肽或蛋白质共价结合,形成mRNA-蛋白质融合体,这一方法已用于多种功能肽的鉴定.以mRNA体外展示技术进行了由大容量多肽库中(＞1013)筛选胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)RNA亲和肽的研究,通过精密的实验设计,建立了一套完整有效的筛选方法,并对实验条件进行了优化.已进行了8轮筛选,结果表明,以mRNA体外展示技术获得的多肽分子,可以与TS mRNA亲和.将测序结果与初始肽库进行比较,发现亲和肽中碱性氨基酸及芳香族氨基酸含量明显增加,说明其在与RNA结合中具有重要作用.mRNA展示技术作为一种大容量文库的体外筛选方法,将广泛应用于与固定化靶物质具高度亲和性及特异性的多肽和蛋白质的筛选.

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