甲状旁腺相关肽调控骨骺干细胞后的stathmin表达

作者：周治国 李丽 郭风劲甲状旁腺相关蛋白骨骺干细胞stathmin

摘要：目的研究甲状旁腺相关肽全长及部分肽段PTHrp（107．139）对体外培养的骨骺干细胞的调控作用并检测调控后stathmin的表达。方法利用免疫磁珠分选细胞的方法，分离出原代骨骺干细胞。转化、提取、鉴定所需的三种质粒。用脂质体介导法将质粒转染入骨骺干细胞，通过G418筛选得到抗性克隆并将其分别扩增培养，并加入1．0pg/ml的强力霉素进行诱导，并设置空白对照。转染后第4小时以及24、72、96小时对各组细胞用Western．blot检测stathmin的表达水平，并抽提各组细胞的RNA进行逆转录，然后通过RT—PCR的方法检测细胞内stathmin的mRNA表达变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果Tet-on基因表达系统能准确的调控骨骺干细胞中的基因表达。质粒转染后骨骺干细胞数量明显增多。PTHrp全长及部分肽段质粒转染实验组，其骨骺干细胞中stathmin的蛋白水平和mRNA水平均逐渐增加，且增高程度大致相当，空白对照组无明显变化。结论甲状旁腺相关肽及其肽段PTHrp（107-139）均可能有促进骨骺干细胞增殖的作用，stathmin在调控中出现高表达，提示细胞增殖。

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