作者：何华伟; 王叶菁; 宋凯; 王姣; 位曙光; 赵...家蚕蛋白酪氨酸磷酸酶克隆表达纯化结构
摘要：蛋白酪氨酸磷酸酶（Protein tyrosine phosphatase，PTP,EC3．1．3．48）特异性地催化去除磷酸化修饰的酪氨酸残基上的磷酸基团，导致蛋白去磷酸化，从而调控了细胞生长、增殖、分化和免疫等生命活动。家蚕Bombyxmori蛋白酪氨酸磷酸酶h（BmPTP-h）参与了核型多角体病毒（Nucleopolyhedrovirus，NPV）在家蚕体内的复制过程，但目前对于BmPTP-h结构和性质的了解并不多。本文从家蚕中肠克隆了BmPTP-h基因编码序列，分析了BmPTP-h的基因组结构、mRNA结构、序列特征、二级结构和溶液中的状态。同源氨基酸序列比对分析表明BmPTP-h与多种昆虫NPV的PTP序列具有高相似度，暗示了它们可能具有共同的起源和相似的功能。文中构建了原核表达载体，通过大肠杆菌在25℃下表达获得了可溶性的重组BmPTP-h，利用Ni-NTA亲和层析纯化了BmPTP-h。凝胶过滤分析显示BmPTP-h在溶液中可以形成聚集体和单体。圆二色光谱分析显示重组的BmPTP-h包含α螺旋结构，升高温度导致BmPTP-h的α螺旋结构去折叠，α螺旋结构含量下降。这些研究为深入研究BmPTP-h的结构和调控机理提供了基础。
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