作者：李国辉; 王鹏; 李芒芒; 徐五; 胡朝阳; 姚...杆状病毒基因表达家蚕二分浓核病毒非结构蛋白ns1
摘要：重组杆状病毒感染昆虫细胞是表达外源蛋白常用的一种方法。为有效鉴定转染的细胞中是否产生了重组病毒粒子，对质粒pFastBacI进行改造，构建了极早期基因据，启动子控制的绿色荧光蛋白egfp基因表达盒，以及多角体基因启动子控制的外源DNA的一个通用型双表达载体；通过酶切、连接的方式，将家蚕二分浓核病毒nsl基因连接到多角体启动子下游；在转座酶的介导下，该供体质粒上部分序列可转座到穿梭载体Bm．Bacmid上，进而构建可同时表达egfp和nsl基因的重组杆粒。将构建的该重组杆粒DNA转染BmN细胞，通过观察可视化的绿色荧光信号，可迅速判定转染后的细胞中重组病毒粒子产生的情况，收集转染后的细胞培养上清，将其感染BmN细胞，对感染4d后的细胞总蛋白进行Westernblotting分析，结果表明能杂交到一条36kDa大小的特异蛋白，表明NSl蛋白成功获得了表达，进而为深入研究nsl基因的功能奠定了基础。
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