作者：吴宏; 房伟; 袁璟; 彭惠; 张学成; 王永中...溶葡球菌酶定点突变peg巯基定点修饰
摘要：为了建立聚乙二醇（PEG）巯基定点修饰溶葡球菌酶的方法,并检验假定连接区的突变与修饰对酶活的影响,对溶葡球菌酶的假定连接区进行了巯基聚乙二醇定点修饰研究。通过分析溶葡球菌酶的结构特征,选择两个结构域之间的氨基酸（133-154aa）进行定点突变引入半胱氨酸残基。使用单甲氧基聚乙二醇马来酰亚胺（mPEG-MAL）进行定点修饰,对修饰后的酶进行纯化并测定酶活性。结果表明定点突变的半胱氨酸残基PEG修饰效率高、产物单一,运用简便的Ni2＋-NTA柱亲和层析法实现了一步分离,获得了高纯度的目标蛋白,但在连接区进行定点突变及PEG定点修饰后的酶活有不同程度的降低,表明假定连接区部分位点的PEG修饰会对溶葡球菌酶的催化活性产生一定影响。
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