作者：解鹃; 周杰; 张海峰; 李寅蓝藻集胞藻phb合成途径代谢工程nadph
摘要：蓝藻是探索利用太阳能生产化学品的重要微生物,但产量低限制了蓝藻化学品的工业应用。提高宿主还原力水平是提高微生物合成化学品产量的重要手段。为提高集胞藻细胞内NADPH含量,利用同源重组方法,获得敲除聚羟基丁酸酯PHB合酶编码基因phaC和phaE的集胞藻Synechocystis sp.PCC 6803突变体S.ΔphaC＆E。PCR结果证明突变体S.ΔphaC＆E基因组中phaC和phaE已完全被氯霉素抗性基因取代。生长曲线结果显示S.ΔphaC＆E的生长与野生型无明显差异,说明敲除phaC和phaE对蓝藻生长的影响很小。用气相色谱检测胞内PHB含量,野生藻S.wt中PHB为细胞干重的2.3%,而突变体S.ΔphaC＆E中没有PHB生成,该结果说明敲除phaC和phaE能够有效阻断集胞藻中PHB合成。通过对野生藻与突变体进一步比较分析,发现S.ΔphaC＆E胞内NADPH浓度明显提高,在第3天时差异最为明显,S.ΔphaC＆E胞内NADPH浓度是S.wt的2.85倍。总之,敲除phaC和phaE不仅可以通过阻断副产物PHB的合成,而且还节约了NADPH,使胞内还原力NADPH的水平明显提高。因此为提高蓝藻化学品产量提供了可以改变碳流向和具有充足还原力的工程集胞藻。
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