作者:吾鲁木汗·那孜尔别克; 严芳; 何翠; 张磊;...兔多杀性巴氏杆菌黏附蛋白cpm36原核表达抗原性
摘要:应用PCR从兔多杀性巴氏杆菌C51-3株基因组DNA中扩增出编码36kD黏附蛋白的cp36基因,将其克隆到pMD18-T载体并对插入片段进行测序。以重组质粒pMD18-cp36为模板,用PCR扩增得到编码信号肽除外的成熟黏附蛋白基因cpm36,并克隆到原核表达质粒pQE30中,得到重组质粒pQE30-cpm36,转化大肠杆菌M15,在IPTG诱导下表达融合蛋白CPM36,经Ni^2+-NTA亲和层析纯化。DNA测序结果表明cp36基因片段大小为1032bp,与已报道的16个血清型多杀性巴氏杆菌cp36基因的核苷酸序列比较,同源性在76.9%~100%之间。SDS-PAGE结果显示,表达分子量约为37kD的带有6xHis标签的CPM36蛋白,与预期分子量相符。Western blotting结果表明,抗重组蛋白抗体分别能与CPM36蛋白和多杀性巴氏杆菌36kD蛋白发生特异性反应,证明原核表达蛋白具有抗原性,为进一步开展多杀性巴氏杆菌免疫保护性抗原的研究奠定了基础。
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