作者：袁伟; 孙伟; 杨爽; 闫继东; 翟春利; 杜君...蛋白质沉淀技术谷胱甘肽巯基转移酶麦芽糖结合蛋白lmo2
摘要：融合蛋白沉淀技术是一种用来研究蛋白质相互作用的新的体外实验技术,通常利用蛋白亲和标签与探针蛋白融合表达来钓取未知相互作用蛋白或验证已知蛋白间的相互作用,其中以谷胱甘肽巯基转移酶（GST）标签最为常用。LMO2（由LIMonly缩写得名,也称Ttg-2或Rbtn2）是一种小分子量难溶蛋白。利用原核系统分别表达了含有GST和麦芽糖结合蛋白（MBP）两种标签的LMO2融合蛋白,发现GST-LMO2融合蛋白以包涵体的形式表达,而MBP-LMO2融合蛋白则能够以可溶形式表达,而且MBP-LMO2的表达量明显高于GST-LMO2融合蛋白。将可溶性的MBP-LMO2融合蛋白和复性后的GST-LMO2融合蛋白分别用于钓取K562细胞中LMO2的结合蛋白,结果显示二者都可以结合K562细胞中内源性的GATA1蛋白,而MBP-LMO2融合蛋白捕获的GATA1蛋白明显多于复性后的GST-LMO2融合蛋白。这一结果提示,在研究一些分子量小、疏水性强的蛋白质时改变标签蛋白可能是一种有益的尝试。
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