作者：潘海韵; 程郢; 朱苏文; 范军玉米定点突变三甲基咕啉
摘要：尿卟啉原Ⅲ甲基化酶是一种新型的红色荧光指示蛋白。但是，在大肠杆菌重组表达的SUMT水溶性相对较低，限制了它的应用范围，而且对于结合在蛋白的色素组分尚不清楚。利用定点突变产生玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶L88R／L89G双突变体和L166A突变体，两种突变体分别在大肠杆菌中重组表达，Ni-NTA一步纯化。紫外可见光谱扫描和质谱分析确定从纯化的L88R／L89G双突变体蛋白分离的色素组分。L88R／L89G双突变体在大肠杆菌细胞内有酶活，而L166A突变体胞内酶活丧失。结合蛋白的主要组分为三甲基化咕啉。纯化的双突变体蛋白水溶性增加，为提高它作为荧光指示蛋白检测外源融合蛋白的水溶性打下基础。
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