作者：吴娜; 张长弓; 谢莲英; 王臻; 颜江华瘦素基因构建表达细胞存活率
摘要：根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列，设计并合成了6个89bp左右的DNA小片段，经重叠延伸PCR扩增获得464bp的rhLep的完整基因片段。构建pET22b（＋）／rhLep表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达。目的蛋白以包涵体的形式表达，表达量占菌体总蛋白的50％以上。表达产物用Ni^2＋亲和层析柱纯化，SDS-PAGE结果表明，含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD。MTT比色法实验显示，当低剂量（10～30ng／mL）时，rhLep具有促进内皮细胞生长的作用；在高剂量（50-225ng／mL）时，rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性。其最大杀伤率达到98．8％。吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用。以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础。
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