作者:张豪; 李晓静; 王德解; 陈璟; 李彦英; 李...甲状旁腺激素转铁蛋白n端半分子融合蛋白毕赤酵母基因表达运输载体腺苷酸环化酶
摘要:利用重叠PCR技术将PTH(parathyroid hormone,甲状旁腺激素)基因与TFN(transferrin N-terminal half-molecule,转铁蛋白N端半分子)基因在体外融合,融合基因克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115.转化子经甲醇诱导后,融合蛋白得到了表达并分泌到发酵上清液中.经SP Sepharose F F阳离子交换层析、Phenyl Sepharose Fast Flow疏水层析纯化获得了纯度大于95%的PTH-TFN样品.Western blot分析及腺苷酸环化酶实验证明融合蛋白中的PTH具有与抗PTH抗体结合能力及刺激腺苷酸环化酶的活性,铁饱和实验证明融合蛋白中的TFN和单独的TFN具有相同铁结合能力.因而TFN可望作为PTH的天然运输载体.
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