作者：徐丽慧; 洪岸; 何贤辉表皮生长因子受体l2结构域原核表达包涵体重折叠
摘要：以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码EGFR-L2结构域的DN段,在其3'端加入编码His6标签的序列,与pET-3c连接构建EGFR-L2原核表达载体.该蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,免疫印迹分析表明表达产物全部以包涵体形式存在,分步透析法和稀释法都不能获得可溶性复性产物,而Ni2+-NTA柱上复性法不仅能够获得可溶性的EGFR-L2蛋白,而且产物同时得到高度纯化,纯度＞95%,复性的EGFR-L2与其配基EGF具有特异性的结合活性,但亲和力较低.这表明His6标签不但便于纯化目标蛋白,而且可利用Ni2+-NTA柱进行柱上复性,适用于不易通过常规方法复性的重组蛋白的制备.
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