作者：赵晶; 王智; 于翠娟; 曹云新; 张莉; 王成...粒酶b绿脓杆菌外毒素诱导表达生长抑制作用
摘要：采用重组PCR法将粒酶B基因的N端信号队和酸性二肽编码序列去除，与两种不同长度的绿脓杆菌外毒素(PE)转位肽序列分别连接，将它们插入pIND诱导表达载体，通过脂质体法与pVgRXR辅助质粒共转染HeLa细胞．建立了重组PE Ⅱ-GrBa基因的诱导表达细胞系：松甾酮A诱导唇Westem印迹检测到目的基因的表达，间接免疫荧光观察到表达细胞出现多核巨细胞的异常形态两种表达的PE Ⅱ-GrBa融合蛋白均能够切割粒酶B的细胞内源性和外源性底物，并且使细胞生长速度减慢。其中，PE Ⅱ(aa 280-358)-GrBa的底物切割能力和生长抑制作用较强。流式细胞仪分析这种抑制作用可能与细胞同期的G2期受到阻遏有关．上述结果证实了PE Ⅱ-GrBa融合蛋白仍然具有抑制细胞生长的作用，并且较短的转位肽对GrBa活性的影响较小，有助于进一步优化转位肽／细胞毒性效应蛋白重组分子的结构用于肿瘤细咆杀伤.
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