作者:连锐航; 房晓祎; 林霓阳氧糖剥夺神经元再生信号通路抑制剂
摘要:目的:探讨联合应用Rho-GTP激酶(ROCK2)抑制剂法舒地尔与糖原合成酶激酶3β(GSK3β)抑制剂4-苄基-2甲基-1,2,4噻二唑烷-3,5-二酮(TDZD-8)对体外培养的皮层神经元氧糖剥夺(OGD)后细胞骨架的稳定、突起再生及细胞凋亡的影响。方法:体外培养至7 d的皮层神经元分为正常对照组、缺氧复氧组、法舒地尔组、TDZD-8组和联合用药(法舒地尔+TDZD-8)组。建立氧糖剥夺模型后,用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK8)检测细胞存活率,原位末端标记染色法(TUNEL)检测细胞凋亡率,神经元标志性蛋白α-3 tubulin免疫荧光染色下测量神经元突起长度,Western Blot检测细胞骨架蛋白肌动蛋白丝(F-actin)及微管蛋白(α-tubulin)的表达量。结果:氧糖剥夺后,细胞存活率减少,凋亡率增加,细胞突起缩短(P〈0.05);单独应用法舒地尔或TDZD-8可以提高细胞存活率,减少凋亡率,促使突起再生(P〈0.05);联合用药后,存活率更高,凋亡率更少,突起长度更长(P〈0.05):氧糖剥夺后,ROCK2和GSK33表达增加,F-actin及α-tubulin表达减少(P〈0.05);应用法舒地尔后,ROCK2表达减少,F-actin表达增加(P〈0.05);应用TDZD-8后,GSK3α表达减少,β-tubulin表达增加(P〈0.05);联合用药后,F-actin及β-tubulin表达量均更多(P〈0.05)。结论:抑制ROCK2或GSK3β均可起到一定程度的稳定细胞骨架、促使突起再生、减少细胞凋亡的作用,联合用药之后效果更强。
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