作者：马俊; 安启坤; 唐文竹类芽孢杆菌菊粉外切酶克隆酶学性质
摘要：将菊粉降解菌Paenibacillus sp.Lfos16的菊粉外切酶基因克隆至表达载体pET-28a(+),转入Escherichia.coli BL21(DE3)中实现了异源表达。利用镍柱亲和层析纯化重组菊粉外切酶,并进行SDS-PAGE检测。重组菊粉外切酶的表观分子质量为87 kDa,经纯化后,重组菊粉外切酶的比酶活为348.30 U/mg。重组菊粉外切酶作用菊粉和蔗糖的酶活分别为259.37 U/mL和592.16 U/mL,I/S值为0.438,且重组酶水解菊粉的主要产物为果糖。重组菊粉外切酶最适作用温度为40℃,且当温度低于30℃时酶活较稳定;最适作用pH为6。Ag+、Cu 2+、Mn 2+、Zn 2+、Hg 2+、Fe 3+具有显著抑制作用。重组菊粉外切酶对菊粉的K m为19.28 mg/mL,V max为0.18 mg/(min·mL)。
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