作者：王鑫; 金鹏; 宋鹏; 董自星; 刘晓光; 王正...酸性蛋白酶黑曲霉分子克隆酶学特征
摘要：酸性蛋白酶在食品、酿造、饲料和皮革等行业具有重要的应用价值。然而,现有的酸性蛋白酶在50℃以上或pH >3.0时不稳定,限制了其应用范围。该研究通过分子克隆技术将黑曲霉CICIMF0510的酸性蛋白酶基因expA在毕赤酵母中进行了克隆表达,构建获得了重组菌GS115(pPIC-expA)。摇瓶发酵条件下,重组酶EXPA的酶活为257380RFU/h。生物信息学分析的结果显示,该酶属于天冬氨酸蛋白酶A1A家族。酶学性质的研究表明,该重组酶的最适反应温度和pH分别为50℃和3.0;分别在40~50℃或pH2.5~3.5孵育1h后,仍能保留80%左右的活力。Zn^2+、Ca^2+、Fe^2+和Mn^2+对其活性有一定的促进作用;而Cu^2+、Co^2+、Fe^3+、EDTA和SDS则对其活性有显著的抑制作用。此外,重组酶EXPA对大豆分离蛋白、水溶性玉米蛋白和小麦水解蛋白均具有较好的水解作用。较好的耐热性和pH稳定性为EXPA在食品、饲料等领域的应用奠定了基础。
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