作者：李梦迪; 张志萌; 董自星; 田康明; 金鹏; ...黑曲霉单宁酶分子克隆酶学特征茶饮料
摘要：单宁酶在茶饮料和医药等行业的应用受到了许多因素的限制,包括酶学性质研究的缺乏和较高的生产成本等。为此,该研究通过基因工程技术将黑曲霉CICIM F0510的单宁酶基因tahA在毕赤酵母中进行了克隆表达,构建获得了重组酶GS115(pPIC-tahA)。摇瓶水平上,重组菌的单宁酶酶活为1.04 U/mL。酶学性质的解析表明,重组酶TahA的最适作用温度和pH值分别为30℃和4.5;分别在20~50℃和pH值3.5~5.0孵育1 h和2 h后,TahA的相对酶活仍能保持在60%以上;Cu^2+、Mn^2+和K+对重组酶的活性有明显的促进作用,而Co^2+、Fe^3+、Ca^2+、Mg^2+、Zn^2+、Sn^2+、EDTA和SDS对其酶活有不同程度的抑制作用;以没食子酸甲酯为底物时,重组酶的V max和K m值分别为0.436μmol/(mL·min)和5.143 mmol/L。此外,该重组酶还可以水解茶叶提取物中的酯型儿茶素。这些良好的生化特征为重组单宁酶TahA在茶饮料行业中的应用奠定了坚实的基础。
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