作者：杨娟; 钟海霞; 李树红; 白稚子; 林灵; 李...鲢鱼重组cystatin酶解抑菌作用双向电泳分析质谱鉴定
摘要：首先通过三羟甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Tricine-SDS-PAGE）和滤纸片法分别鉴定木瓜蛋白酶液（Papain）对鲢鱼重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Cystatin）酶解程度及酶解产物对草鱼冷藏肉片中分离的3种优势腐败菌,即草莓假单胞菌（Pseudomonas fragi）、腐败希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）和中间气单胞菌（Aeromonas media）的抑菌活性。结果表明,酶解6 h后的产物,即9.5 ku以下的片段对3种菌的抑菌效果均最好。再利用凝胶过滤高效液相色谱（TSK-GEL G2000SWXLHPLC）和双向电泳对6 h酶解产物进行分离纯化分析。发现仅峰T-2对3种菌均具有明显的抑制活性,峰T-2在TSK-GEL G2000SWXLHPLC上呈现单一峰,电泳得到单一蛋白点,其分子质量为8.6 ku,p I值为6.5。最后通过RPLC-MS/MS串联质谱鉴定该蛋白点,得到3个肽片段（31QSNDAFVR38、46VQQQVAAGMKY56和81NPSIEQVIQ89）且含有Cystatin特征序列QVAAG。结果提示,Cystatin蛋白（完整序列分子质量12~14 ku）内部,存在能够发挥抑菌作用的肽片段。
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