作者：马文瑞; 邹弯; 魏玉洁; 严密; 全莉; 王雪...酿酒葡萄品种sequencerepeats单因素正交优化设计
摘要：以酿酒葡萄品种为原料，研究了聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系的主要成分对葡萄简单序列重复(simple sequence repeats,SSR)扩增结果的影响，并确定了各成分的最佳用量。以改良的十六烷基三甲基溴化铵法(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)从葡萄中提取基因组DNA，通过单因素试验分析SSR-PCR体系中主要成分Mg 2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度和模板DNA浓度对葡萄SSR-PCR反应体系扩增效果的影响。同时，采用正交优化设计试验确立酿酒葡萄SSR-PCR最佳25μL反应体系为Mg 2+浓度为2.5 mmol/L，dNTPs为0.15 mmol/L，Taq DNA聚合酶为1.5 U，引物为0.5μmol/L，DNA含量为40 ng/25μL。通过优化试验的直观分析和方差分析得出PCR体系的主要成分对扩增结果的影响程度依次为：Mg 2+>Taq DNA聚合酶>dNTPs>引物>模板DNA。利用此体系对4个酿酒葡萄品种DNA进行SSR-PCR反应体系扩增并进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，结果扩增条带清晰稳定，说明该体系可用于酿酒葡萄品种SSR标记的研究。
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