作者：王颖 范铭 薛素妹 钱凯 齐斌 朱益波巨大芽孢杆菌重组大肠杆菌全细胞转化
摘要：苯基乳酸是一种新型天然广谱抑菌物质,L-乳酸脱氢酶是微生物转化苯丙酮酸合成L-苯基乳酸的关键酶,通过构建过量表达L-乳酸脱氢酶的重组大肠杆菌,提高大肠杆菌合成L-苯基乳酸（苯基乳酸,phenyllactic acid,PLA）的能力。以Bacillus megaterium Z2013513基因组为模板,经PCR扩增得到L-乳酸脱氢酶基因,连接表达载体p ET-28a（＋）并导入到大肠杆菌BL21（DE3）,获得重组大肠杆菌BL21（DE3）/p ET-28a-ldh L。SDS-PAGE电泳和酶活分析表明,约在40 ku处出现显著特异性条带,粗酶液酶活力达3.4 U/mg。在37℃、200 r/min条件下,25 g/L（干重）重组大肠杆菌经60 min将70.32 mmol/L苯丙酮酸全细胞转化合成50.59 mmol/L L-苯基乳酸。由于具有较高的产物光学纯度（96.98%e.e.）和底物摩尔转化率（71.94%）,表明一步生物转化法能高效地合成L-苯基乳酸。
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