作者：杜艳; 陈复生; 陈晨; 刘营大豆分离蛋白大豆浓缩蛋白大豆籽粒dna提取实时荧光聚合酶链式反应
摘要：采用紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法和实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)等检测DNA浓度、纯度、完整性和反应灵敏度,综合评价Nucleo试剂盒、Wizard试剂盒、Dneasy试剂盒、Ezup试剂盒、Dzup试剂盒和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)法对大豆蛋白及大豆籽粒中DNA的提取效果,旨在筛选出适用于大豆分离蛋白(soybean protein isolate,SPI)、大豆浓缩蛋白(soybean protein concentrate,SPC)及大豆籽粒中DNA提取的最佳方法,提高转基因大豆检测的精确性和准确性。结果表明,Nucleo试剂盒和Dneasy试剂盒能够得到纯度高、完整性好的DNA,符合实时荧光PCR的检测要求。Dneasy试剂盒提取的DNA纯度更高,更有利于提高后续PCR的重复性、稳定性和精确性,普遍适用于SPI、SPC以及大豆籽粒中DNA的提取。Wizard试剂盒、Ezup试剂盒和SDS法提取效果适中,SDS法成本最低,但耗时最长。Dzup试剂盒得到的DNA虽然浓度高,但含杂质较多,对实时荧光PCR具有抑制作用,且无法保持完整的基因组DNA,不适用于大豆转基因检测中的DNA提取。采用Dneasy试剂盒提取得到的SPI和SPC样品DNA,对不同长度lectin基因扩增结果不同,表明在蛋白制备过程中lectin基因可能存在降解。
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
