作者：张大川 房国梁 李琦 陈江源 王岚 李睿 刘...重组表达
摘要：目的：研究丝状噬菌体基因V蛋白（gene V protein,GVP）基因的合成、重组表达及其功能。方法：根据GVP的基因序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计合成了8个寡核苷酸片段,利用重叠延伸PCR合成GVP基因序列,将其与原核表达载体pET-28a-c（＋）质粒重组,转化大肠杆菌,获得GVP蛋白阳性表达菌株,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达,产物经Ni＋-NTA琼脂糖凝胶层析纯化,获得目的蛋白GVP,DNA结合实验检测其功能。结果：成功合成出GVP基因,重组体在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导获得高效表达,DNA结合实验表明GVP与单链DNA间解离平衡常数Kd=7.27×10-5mol/L。结论：重组构建并高效表达的GVP蛋白具有较高单链DNA结合能力,可用于食品病原微生物特定单链DNA分子的浓缩和分离。
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