作者：王月皎; 何浪; 王飞; 张瑜; 李迅嗜热菌木聚糖酶低聚木糖大肠杆菌
摘要：目的：为了获得一种耐高温的木聚糖酶，并对其生物特性进行表征，使其能够更有效地应用于低聚木糖的制备。方法：首先通过生物信息学分析，确定来自厌氧孢子菌Caldicellulosiruptor saccharolyticus DSM 8903的木聚糖酶（CsXynB）基因序列，然后扩增CsXynB基因，以pET-20b为载体，构建重组质粒，将其转入大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中表达，重组酶通过热处理和镍柱亲和层析纯化获得纯酶，将纯酶用于后续酶学性质和降解木聚糖的研究。结果：通过生物信息学方法研究表明，CsXynB属于糖苷水解酶第10家族。CsXynB的最适反应温度为80℃，最适反应pH为6．5。在65℃以内，pH为5．5～7．5的条件下重组木聚糖酶的稳定性较高。以榉木木聚糖为底物时，CsXynB的Km，Vmax和Kcat值分别为1．8mg／mL，46．0U／mg和60．7 S-1。在65℃、pH6．5条件下，以榉木木聚糖为底物，木聚糖酶CsXynB反应1h，生成的低聚木糖的主要成分为木二糖和木三糖。结论：CsXynB是一种极具特点的耐高温木聚糖酶，可以催化水解木聚糖生成高含量的木二糖和木三糖，在生产低聚木糖的应用中具有潜在价值。
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