作者：付大伟; 陈启蒙; 徐伟t4dna连接酶融合标签自诱导磁珠法纯化低背景克隆载体连接
摘要：构建舍SUMO、IF2、GST、NusA、MsyB、Trx和MBP融合标签的重组表达载体，转化到大肠杆菌E-coli Transetta（DE3）中进行自诱导（auto—induction，AI）表达，以提高T4DNA连接酶（T4 DL）的表达产量。通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况，10％SDS—PAGE电泳结果显示，重组菌Transetta（DE3）（pNBEVII—T4 DL）诱导表达的可溶性融合蛋白Trx—T4 DL的产量最多，经诱导培养各件优化后，Trx—T4 DL的可溶性大幅度提高，确定了最佳诱导条件为30℃、装瓶量50mL／250mL、接种量2‰、pH7。分别用镍柱和MagNi磁珠纯化重组菌破碎后上清中的融合蛋白Th-T4 DL，结果显示后者纯化效率更高，最终获得的融合蛋白浓度为1700．462mg／L。与其他公司T4DL活性进行比较，检测其酶活性约为500U／uL，并使其成功应用于低背景重组克隆载体构建中，为融合蛋白Trx-T4DL的生产及应用提供理论基础。
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