作者：王俊平; 张伟伟; 杜欣军; 吴懿娜; 董峰; ...西维因单链抗体克隆表达活性
摘要：利用兼并引物从西维因单克隆杂交瘤细胞的cDNA中克隆得到抗体基因的轻链可变区（VL）和重链可变区（VH），长度分别为324bp和360bp，将其分别连接入pGEM—T—Easy载体进行测序；根据测序结果设计特异性引物和连接序列（Gly4Ser）3，利用重叠延伸PCR扩增得到长度为729bp的单链抗体基因片段（scFv），亚克隆至原核表达载体pET30a（＋），并转化感受态细胞BL21（DE3）进行诱导表达；聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）结果显示，重组表达单链抗体形成包涵体，分子量大小约为33kDa，变性后利用不同条件进行复性，结果显示最佳复性时间为48h，最佳起始蛋白浓度为200μg／mL，含有精氨酸的复性液效果最佳；利用亲和层析纯化scFv，并利用竞争ELISA检测其活性，结果显示该seFv对西维因具有良好的亲和性和特异性。
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