作者：张丽媛; 王立恒; 王丽莉; 董佩佩; 刘和真...硼亲和色谱糖肽糖蛋白分离选择性富集
摘要：硼亲和色谱法在糖肽/糖蛋白选择性富集中的应用趋于成熟。硼酸亲和材料的选择性,生物相容性,制备过程是否简便均是开发新型苯硼酸功能化材料需要考虑的问题。该研究立足硼酸亲和材料开发的关键问题,设计并开发了一种新型苯硼酸亲和硅胶(TCNBA)。该材料采用基于叠氮基-氰基的无铜催化点击化学方法进行合成,生物相容性好,制备方法简便。红外光谱和X射线光电子能谱图表征结果证明材料合成成功。TCNBA的糖肽富集选择性利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行评价,结果表明,TCNBA能够分别从辣根过氧化物酶(HRP)和免疫球蛋白G(IgG)酶解液中鉴定出13个和11个糖肽;以HRP和牛血清白蛋白(BSA)酶解液混合物(物质的量比1∶10)作为研究对象,富集后能够鉴定出5个糖肽。TCNBA的糖蛋白富集选择性利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)进行评价,以HRP、IgG、核糖核酸酶B(RNaseB)作为考察对象,结果表明,TCNBA对糖蛋白具有较好的富集选择性。以实际样品人血清为测试对象验证TCNBA在实际生物样品中的应用价值。结果显示,富集后非糖蛋白得到较大程度去除,糖蛋白得以富集。所制备的材料和方法具有大规模实际蛋白质样品分离处理的应用前景。
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